摘要：抗生素类药物中的聚合物研究一直是业内研究的热点，也是CDE审评的重点，本文以某抗生素为例，阐述其聚合物控制的研究思路及控制过程，不足和缺陷之处望同行批评指正。
一、背景介绍：
抗生素类药物质量研究中最关注的一类杂质为聚合物类杂质，聚合物杂质是指抗生素类药物分子之间通过共价键的形式结合，形成的一系列不同分析量的杂质，主要包括二聚体、三聚体以及多聚体等，其形成基质为该类药物分子中通常含有游离的氨基和结构不稳定的四元内酰胺环，容易发生反应，产生聚合物杂质。
目前已报道的检测方法主要包括葡聚糖凝胶G10色谱法、尺寸排阻色谱法（SEC）、二维柱切换质谱联用法等，本文以某抗生素钠为例，通过TSK-二维质谱联用技术对其聚合物进行定性研究，然后锁定聚合物的结构，定向合成聚合物杂质，采用RP-HPLC法对聚合物杂质进行定量控制。
二、TSK-二维质谱联用技术对其聚合物进行定性研究
01.一维色谱条件
供试品配制：取抗生素钠，精密称定，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含主成分0.5mg的溶液，作为供试品溶液。
色谱柱：TSKgelG20SWXL（7.8mm×300mm，5.0μm）；流动相A：磷酸盐缓冲液(pH7.0)，0.5mol/L磷酸氢二钠溶液-0.5mol/L磷酸二氢钠溶液，体积比为63：37；流动相B：乙腈；洗脱方式：等度洗脱；
洗脱程序为：
检测波长：220nm；柱温：室温；进样体积：10uL。
02.二维色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A：5mM乙酸铵(调pH为4.0，优选用乙酸调节pH)水溶液；流动相B：乙腈；柱温：室温检测波长：220nm；
洗脱程序为：
质谱条件为：
质谱扫描模式为：
二维收集条件
主峰前两个杂质二维分离后MS定性研究结果显示：杂质1分子离子峰m/z为957，杂质1分子离子峰m/z为957，杂质2分子离子峰m/z为428。
杂质1
杂质2
根据杂质I和杂质2质谱信息可知杂质1为聚合物分子（m/z977），杂质2为小分子杂质。
根据杂质1的质谱信息，推断形式机制如下：
降解途径为两分子抗生素发生酯化反应产生：
三、RP-HPLC聚合物控制
通过制备液相获得聚合物1对照品，采用反相高效液相色谱法对其进行控制。
供试品溶液取本品，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5mg的溶液。
对照品溶液取聚合物对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.5ug的溶液。
色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以三乙胺醋酸溶液(取三乙胺14ml与冰醋酸 5.7ml，加水稀释至100ml，摇匀) –乙腈-水(1.2:120:880) ，并用冰醋酸调节pH值至3.0±0.2为流动相；检测波长为254nm；进样体积20ul。杂质1谱图如下所示，保留时间70min处的峰为聚合物1。
四、结论：
通过TSK色谱法将聚合物峰与主峰分离，运用二维柱切换结合质谱技术将聚合物杂质峰进行二次分离并定性，然后利用合成制备液相技术进行组分富集及制备，得到纯度较高的聚合物单体对照品，进而采购常规的RP-HPLC法对聚合物杂质进行定量控制，确保了该抗生素品种的质量可控。
五、参考文献
[1] 2020版《中国药典》二部。
[2] 注射用头孢西丁钠的聚合物杂质分析[J].中国新药杂志 2021 年第 30 卷第 11期。
2025-06-15
26页
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