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siRNA转染篇-2丨基因表达不降反增？阴性对照也有敲低效果？

基因
05/20
19


siRNA转染



大家了解了siRNA转染后所常见的问题，包括qPCR没变化、蛋白表达量不见下降。今天来学习一下更加让大家苦恼的情况：siRNA转染后，基因表达不降反增？阴性对照也有敲低效果怎么办？如何应对这种该降的不降，不该降的乱降的问题呢？



1


基因表达不降反增？


一般siRNA对mRNA的沉默作用会导致目的基因在mRNA水平上降低，但实际情况也可能出现qPCR结果上升的情况。

一般考虑一下两种情况：

  1. 转染条件刺激细胞基因异常表达

  2. 检测结果误差较大

具体如何操作，请看视频讲解~



2


阴性对照也有敲低效果？


由于转染试剂或外源RNA的刺激，转入siRNA的细胞基因表达与未处理的空白细胞可能存在一定区别，所以需要设置阴性对照实验排除影响。若阴性对照也出现敲低。

考虑一下几种情况：

  1. 转染试剂非特异性作用结果

  2. 干扰序列的非预期性off-target作用

具体操作，请看视频讲解~



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