G蛋白偶联受体（GPCRs）一直是新型治疗药物的重要靶点。因此，在生物学相关条件下深入了解它们与生物活性化合物（包括结合亲和力和动力学）的相互作用，对于药物发现和基础研究都是至关重要的。为此，Promega开发了生物发光共振能量转移（BRET）测定法，用于定量活细胞表面特定GPCRs上的动态结合相互作用。该测定法结合了BRET的特异性与由发光HiBiT肽提供的高灵敏度。通过竞争性结合荧光示踪剂，BRET用来定量配基与其相应HiBiT标记的GPCR之间的相互作用。同时，HiBiT与细胞非渗透性LgBiT的高亲和力互补限定了明亮的生物发光供体信号在细胞表面，并消除了来自细胞内受体的发光背景。值得注意的是，荧光示踪剂的可用性仍然是该方法的一个瓶颈。缓解为每个受体开发特定示踪剂负担的一种方法是使用泛亲和性的示踪剂，这得益于BRET固有的特异性。在这里，我们强调了利用机器学习指导的计算机筛选来识别对GPCRs显示泛亲和性结合的骨架结构，这些骨架结构可以进一步修饰上荧光基团。此外，我们展示了这些基于BRET的结合测定法在终点和动力学模式下研究GPCR-配基相互作用的实用性。